紫外可見分光光度計(jì)的分類及校正標(biāo)準(zhǔn)

1. 單光束分光光度計(jì)

其光路示意圖如前面的圖13.14所示，經(jīng)單色器分光后的一束平行光，輪流通過參比溶液和樣品溶液，以進(jìn)行吸光度的測定。這種簡易型分光光度計(jì)結(jié)構(gòu)簡單，操作方便，維修容易，適用于常規(guī)分析。國產(chǎn)722型、751 型、724型、英國SP500型以及Backman DU－8型等均屬于此類光度計(jì)。

2. 雙光束分光光度計(jì)

其光路示意于圖13.17。經(jīng)單色器分光后經(jīng)反射鏡（M1）分解為強(qiáng)度相等的兩束光，一束通過參比池，另一束通過樣品池，光度計(jì)能自動比較兩束光的強(qiáng)度，此比值即為試樣的透射比，經(jīng)對數(shù)變換將它轉(zhuǎn)換成吸光度并作為波長的函數(shù)記錄下來。雙光束分光光度計(jì)一般都能自動記錄吸收光譜曲線。由于兩束光同時(shí)分別通過參比池和樣品池，還能自動消除光源強(qiáng)度變化所引起的誤差。這類儀器有國產(chǎn)710型、730型、740型等。



3. 雙波長分光光度計(jì)

其基本光路如圖13.18所示。由同一光源發(fā)出的光被分成兩束，分別經(jīng)過兩個(gè)單色器，得到兩束不同波長（λ1和 λ2）的單色光；利用切光器使兩束光以一定的頻率交替照射同一吸收池，然后經(jīng)過光電倍增管和電子控制系統(tǒng)，zui后由顯示器顯示出兩個(gè)波長處的吸光度差值 。對于多組分混合物、混濁試樣（如生物組織液）分析，以及存在背景干擾或共存組分吸收干擾的情況下，利用雙波長分光光度法，往往能提高方法的靈敏度和選擇性。利用雙波長分光光度計(jì)，能獲得導(dǎo)數(shù)光譜。通過光學(xué)系統(tǒng)轉(zhuǎn)換，使雙波長分光光度計(jì)能很方便的轉(zhuǎn)化為單波長工作方式。如果能在λ1和λ2處分別記錄吸光度隨時(shí)間變化的曲線，還能進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)動力學(xué)研究。

光度計(jì)的校正

通常在實(shí)驗(yàn)室工作中，驗(yàn)收新儀器或儀器使用過一段時(shí)間后都要進(jìn)行波長校正和吸光度校正。建議采用下述的較為簡便和實(shí)用的方法來進(jìn)行校正。
鐠玻璃或鈥玻璃都有若干特征的吸收峰，可用來校正分光光度計(jì)的波長標(biāo)尺，前者用于可見光區(qū)，后者則對紫外和可見光區(qū)都適用。
可用K2CrO4標(biāo)準(zhǔn)溶液來校正吸光度標(biāo)度。將0.0400gK2CrO4溶解于1L的0.05mol·L－1KOH溶液中，在1cm光程的吸收池中，在25oC時(shí)用不同波長測得的吸光度值列于表13.5 。